中壓制備色譜的多種分析方法探討

　　中壓制備色譜的主要部件為輸液泵、進(jìn)樣閥、檢測器、餾分收集器等，比如瑞士公司的早期的中壓液相制備色譜，其輸液泵流速可達156mL/min，并配有阻尼器，以保證液流的穩定；進(jìn)樣器配有0.5-50mL的不同體積的定量管；檢測器有紫外和示差折光檢測器，流通池體積比較大，允許大流量流動(dòng)相通過(guò)而無(wú)需分流；餾分收集器有原盤(pán)式和排式兩種，原盤(pán)式的接收管多達80個(gè)，而后者則更多；色譜柱內徑9-105mm，長(cháng)度250-1760mm不等。

 

　　對于一般中壓制備色譜，當色譜柱直徑較大時(shí)，柱頭往往設計成錐形或有類(lèi)似于傘狀的液流導向結構，使得當大量樣品進(jìn)入到柱頭上時(shí)，能迅速地分散到整個(gè)柱橫截面上，及時(shí)被流動(dòng)相沖走，避免了因樣品的局部過(guò)濃而引起柱超負荷和譜帶加寬。柱子填料則采用比較耐壓的交聯(lián)改性的多糖凝膠(如Sepharose CL，Superose等)，聚合物微球，復合材料介質(zhì)或硬質(zhì)SiO2基體的化學(xué)鍵合相等，粒徑一般在25～40um（常用的填料尺寸是15-25um，25-40um或40-63um），可采用濕法或干法裝柱。

 

　　中壓制備色譜根據液相方法的流速和洗脫時(shí)間計算溶劑消耗量，裝流動(dòng)相的容器應清潔。含水流動(dòng)相建議在實(shí)驗前配制，并注意流動(dòng)相的保質(zhì)期。色譜柱都有一定的pH使用范圍，流動(dòng)相的pH應在色譜柱耐受的pH范圍內。長(cháng)時(shí)間停用或者更換流動(dòng)相等，可能導致溶劑管路或溶劑泵被引入氣泡，需要先排出氣泡再進(jìn)行實(shí)驗。操作方法：打開(kāi)溶劑泵的排空閥，開(kāi)啟溶劑泵的流速，排出溶劑管路和泵中氣泡，直至排出的廢液連續無(wú)間斷，表明氣泡已排干凈。