液氮冷凍研磨機提取RNA步驟探討

　　液氮冷凍研磨機的設計人性化、安全高效、耐用、操作簡(jiǎn)單、準確性和重現性好、避免樣品間的交叉污染，適應不同客戶(hù)的各種需求，是*的“研磨手段”，廣泛應用于生物化學(xué)、動(dòng)植物、醫學(xué)、礦物學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域。

　　液氮冷凍研磨提取RNA該如何進(jìn)行？一起來(lái)看看：

　　1.用75%酒精對實(shí)驗操作臺、移液槍、槍頭盒、管架進(jìn)行消毒，然后再用RNase Zap擦拭上述材料。

　　2.取出-80℃冰箱保存的組織塊，放于用液氮預冷過(guò)的研缽中，敲碎一小塊組織，其余放回凍存管。

　　3.加入液氮，先輕輕敲碎組織到小塊，再研磨成粉末，直到看不到組織塊。

　　4.加入液氮使粉末凝聚成團，馬上用藥勺把粉末轉移到2.0ml EP管中。

　　5.待液氮揮發(fā)干后，加入1ml Trizol裂解液，用1ml移液器將細胞吹散開(kāi)，保證細胞裂解充分，必要時(shí)可借助水平振蕩器混勻。

　　6.4℃離心機12000rpm離心5分鐘，棄沉淀。

　　7.加入CHCl3，比例200ul CHCl3/ml Trizol，顛倒混勻，室溫放置15分鐘。

　　8.于4℃離心機12000g離心15分鐘。取上清液，注意吸取上清是無(wú)觸碰到中間層或下層。

　　9.取上清液，注意吸取上清是無(wú)觸碰到中間層或下層。

　　10.加入等體積異丙醇，-20℃沉淀1小時(shí)。

　　11.于4℃離心機12000g離心10分鐘。

　　12.棄上清，加入1ml 75%酒精漂洗沉淀，于4℃離心機800g離心5分鐘。必要時(shí)可重復酒精洗滌。

　　13.棄上清，可選擇再次離心去除殘留的乙醇，沉淀在安全柜內晾干，切忌過(guò)干，只需目測乙醇揮發(fā)干即可。

　　14.根據沉淀的大小，使用無(wú)RNA酶的水將RNA沉淀充分溶解。選擇溶解沉淀的體積，一般為30-100ul。測RNA濃度，此方法RNA A260/A280值在1.6-1.8之間。

　　15.電泳檢測RNA完整性，0.5XTBE Buffer，110V電泳30分鐘。

　　16.后將沉淀保存在-80℃低溫冰箱。