帕金森病的希望：對α-突觸核蛋白聚集抑制劑的研究突破

  Jody Mason博士在美國JBC上發(fā)表文章，驗證了構建抗α-Syn聚集肽抑制劑的方法，而且為潛在的藥物候選分子提供了一種很有前途的肽序列。梅森博士評論道：“使用CEM公司的Liberty Blue做多肽合成實(shí)驗，它能夠快速合成研究所需的多肽，節省了我們大量的成本和時(shí)間，我們也愿意嘗試更多的研究，面對更多的風(fēng)險和挑戰。Liberty Blue是我們實(shí)驗室的一個(gè)很好的補充，我強烈建議其他研究人員使用這個(gè)系統。”

  帕金森病是神經(jīng)系統的一種漸進(jìn)性疾病，約占所有癡呆癥的15%。多見(jiàn)于老年人，據國內機構統計，我國65歲以上人群患病率大約是1.7%，并隨年齡增長(cháng)而升高，據推算，目前國內帕金森病患者已經(jīng)超過(guò)220萬(wàn)。

  目前的醫學(xué)水平對這一病理改變的準確病因仍不清楚，也沒(méi)有一個(gè)明確的診斷方法（主要依靠病史、臨床癥狀及體征），目前藥物治療是zui主要的治療手段，手術(shù)治療是藥物治療的一種有效補充。應用的治療手段雖然不能阻止病情的進(jìn)展，也無(wú)法治愈疾病，但能改善癥狀，有效的提高患者的生活質(zhì)量。

  對于這個(gè)“老大難”，各大藥廠(chǎng)使出渾身解數，近幾年，上市了幾款帕金森新藥，像奧匹卡朋（Opicapone）、GOCOVRI （緩釋金剛烷胺）等，但對于這個(gè)漸進(jìn)性的疑難病來(lái)說(shuō)，仍未突破既往的作用靶點(diǎn)。迫于研發(fā)難度和資金壓力，制藥大亨輝瑞公司在2018年年初宣布，將放棄研發(fā)治療阿茨海默癥和帕金森癥的新藥，裁撤時(shí)間科學(xué)研究和早期發(fā)展項目約300個(gè)相關(guān)職位，足可見(jiàn)研發(fā)帕金森類(lèi)藥物的困難程度。

  帕金森病是神經(jīng)系統的一種漸進(jìn)性疾病，約占所有癡呆癥的15%。多見(jiàn)于老年人，據國內機構統計，我國65歲以上人群患病率大約是1.7%，并隨年齡增長(cháng)而升高，據推算，目前國內帕金森病患者已經(jīng)超過(guò)220萬(wàn)。目前的醫學(xué)水平對這一病理改變的準確病因仍不清楚，應用的治療手段雖然不能阻止病情的進(jìn)展，也無(wú)法治愈疾病，但能改善癥狀，有效的提高患者的生活質(zhì)量。

  帕金森的病理特征是蛋白質(zhì)團簇的形成，這些蛋白質(zhì)稱(chēng)為路易體。 α-Syn（一種突觸前神經(jīng)元蛋白質(zhì)）作為路易體的主要成分，與帕金森病有密不可分的，因此引起了科學(xué)界極大的興趣。 目前的研究表明，α-Syn通過(guò)中間可溶的寡聚構象(稱(chēng)為原纖維)來(lái)幫助路易體。 而這些原纖維在神經(jīng)元包涵體中沉積，然后通過(guò)影響細胞內靶標和突觸功能而導致細胞死亡。

  之前的研究已經(jīng)證明，α-Syn的71-82區域負責整個(gè)140 mer蛋白的聚集。但是梅森博士的小組指出，早發(fā)性帕金森病相關(guān)的突變是在該蛋白質(zhì)的另一個(gè)片段中發(fā)現的。在觀(guān)察到大多數突變后，發(fā)現該突變位于或非常接近46-53區域，他們選擇根據這個(gè)肽段檢測一個(gè)10聚體，具體而言，他們創(chuàng )建了45-54序列的209952個(gè)成員庫，其中包括已知的突變，以及如圖1所示的一系列可選的殘基選擇。然后用多路復用的細胞內蛋白片段互補分析法(PCA)篩選該多肽庫。在此基礎上，從文庫中篩選出約200個(gè)候選基因。隨后，在序列選擇生長(cháng)條件下進(jìn)行了基于競爭的主成分分析，闡明了生長(cháng)速率的差異。競爭主成分分析從zui初發(fā)現的200個(gè)α-Syn結合劑中獲得了一個(gè)zui有前途的序列，可以通過(guò)測序來(lái)確定。 

圖1. α-Syn(TOP)的45-54原生型序列被用來(lái)建立一個(gè)209952個(gè)成員肽庫。包括與早發(fā)帕金森病相關(guān)的殘基位置和選項(下劃線(xiàn)和粗體表示部分)。

  從競爭的PCA循環(huán)中鑒定的前導肽候選物能夠與疾病相關(guān)的原生型α-Syn結合并降低淀粉樣蛋白的形成超過(guò)90%。梅森博士然后利用固相多肽合成技術(shù)原生型45-54，α-Syn肽(作為對照)和PCA衍生肽候選物，研究其對140聚體原生型α-Syn結合的影響。從PCA研究中得到的肽能夠防止原生型α-Syn在1:1化學(xué)計量下聚集，與原子力顯微鏡（圖2）和THT染料結合試驗一起證實(shí)，圓二色性實(shí)驗證實(shí)幾乎*預防了多肽的β折疊二級結構。正如預期的選擇方法，抑制劑也導致與α-Syn聚集相關(guān)的毒性大幅度降低。因此，該研究不僅驗證了構建抗α-Syn聚集肽抑制劑的方法，而且為潛在的藥物候選分子提供了一種很有前途的肽序列。

圖2. 左邊顯示的是α-Syn蛋白形成的毒性淀粉樣纖維的原子力顯微鏡圖像。這些都是在帕金森病患者的大腦中發(fā)現的。右邊是與新衍生肽混合的同一蛋白質(zhì)。多肽結合在α-Syn蛋白中的粘性部分，幾乎*阻止了纖維的形成。

  梅森博士在2013年底開(kāi)始使用CEM的 Liberty Blue™多肽合成儀。該系統使他能夠快速合成研究所需的多肽。相較于之前購買(mǎi)多肽，現在能夠節省大量的成本和時(shí)間，這對他的工作來(lái)說(shuō)是非常有價(jià)值的。另一個(gè)好處，梅森博士不再關(guān)心是否有足夠的肽材料用于實(shí)驗問(wèn)題，因為現在他可以快速有效地制造更多的肽。梅森博士評論道：“自從有了Liberty Blue，我們愿意嘗試更多的研究，并能面對更多的風(fēng)險挑戰。Liberty Blue是我們實(shí)驗室的一個(gè)很好的補充，我強烈建議其他研究人員使用這個(gè)系統。”

Jody Mason博士發(fā)表的文章：

Intracellular Screening of a Peptide Library to Derive a Potent Peptide Inhibitor of a-Synuclein Aggregation

Journal of Biological Chemistry, 2015, 290 (12), 7426–7435

DOI: 10.1074/jbc.M114.620484